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本发明提供了一种抗人源多药耐药蛋白Fab抗体及其制备方法，属于抗体及其制备领域；本发明为取多药耐药性大肠癌病理组织总RNA并逆转录为cDNA，利用本实验室设计的特异性引物扩增出P‑gp跨膜区(氨基酸784～968)基因片段，克隆至pET28a(+)载体并转化E.coli BL21(DE3)，IPTG，30℃诱导表达，表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后Western Blot鉴定。将纯化的P‑gp784‑968蛋白作为抗原，对利用17条重链上游引物和5条重链下游引物；20条轻链上游引物及2条轻链下游引物，用原核表达的P‑gp784‑968肽段对 pComb3载体的P‑gp Fab抗体库进行五轮淘选，最终淘选所获得的克隆进行双酶切鉴定及IPTG诱导表达，表达产物通过ELISA及Western Blot鉴定后获得阳性克隆菌株，并测序，得PFab29。本发明为制备抑制肿瘤多药耐药的药物提供可能。